Ubri-Amrita™ iPSC重编程RNA-LNP试剂盒，是宜明生物面向PBMC开发的高性能iPSC重编程方案。产品采用自研circRNA-LNP递送系统：以环状RNA承载重编程因子、LNP完成胞内递送，全程不依赖病毒、不整合进宿主基因组，同时借助circRNA更长的表达窗口匹配PBMC重编程所需周期。试剂盒操作便捷、重复性稳定，支持PBMC、成纤维细胞等多种体细胞重编程，可满足iPSC建系、疾病模型构建及转化研究需求。 

中国发明专利号：ZL202510534765.1；circRNA无痕环化技术专利申请号：CN202611303928.6

本方案提供标准操作参考，可根据具体实验条件进行调整。对起始细胞用量，LNP用量和孔板大小进行适当的成比例放大或缩小，以适配特殊的上下游实验方案。

Version 2.0（无需离心版）：基于circRNA-LNP的PBMC重编程时间表，SFEB表示Serum-free Enhancer B

重编程时间表：

准备阶段

用Ubri-Amrita™PBMC完全培养基将细胞稀释后，接种到表面处理的孔板中并隔天补充。 

重编程阶段

DAY 0，将PBMC细胞接种至LN521包被的12孔板，并向细胞培养物中加入RNA-LNP试剂；

DAY 2，不换液，每孔直接加入Ubri-Amrita™ iPSC重编程培养基和RNA-LNP试剂；

DAY 4 ，重复DAY 2的操作，每孔直接加Ubri-Amrita™ iPSC重编程培养基和RNA-LNP试剂；

DAY 6-16，每隔一天用1 mL的Ubri-Amrita™ iPSC重编程培养基进行换液，并监测iPSCs克隆形成情况；

Day16-20，当iPSCs克隆足够大时，挑取单个iPSCs克隆。

重编程过程中的细胞形态：

 图像显示了重编程过程中PBMC的形态变化和iPSCs的出现。（红色箭头指示形变细胞）

干性标记物鉴定

iPSC特异性标志物流式检测（SSEA4、TRA-1-81、SOX2、Nanog)

干性标记物鉴定

iPSC核型检测

三胚层分化能力鉴定

iPSC特异性标志物免疫荧光检测（Nestin、SMA、FOXA2）

不同年龄、性别供体 PBMC均可经circRNA‑LNP重编程获得干性稳定、特异性标志物高表达的iPSC，方案供体适用性广。

图为不同年龄/性别供体PBMC重编程得到的iPSC克隆数统计（每1E5 PBMC）。10–60岁范围内男女供体均可成功获得iPSC克隆，克隆数未随年龄增加呈现持续下降趋势，方案供体适用性广。

图为不同年龄/性别供体iPSC克隆的特异性标志物检测。SSEA4、TRA‑1‑60、TRA‑1‑81 保持高阳性表达，iPSC干性稳定，不受供体年龄显著影响。

美国埃默里大学医学院团队在《IJMS》发表研究，利用同一例遗传性长QT综合征患者的PBMC，对比circRNA-LNP与仙台病毒重编程技术。结果表明circRNA-LNP能够完整维持疾病表型，省去多轮传代清除载体的操作，最早可在P3–P4代开展克隆鉴定，整体周期更快、成本更优；文献数据显示，相比仙台病毒法可节省63.6%的培养基与耗材。

DeBose M. et.al.,  Int J Mol Sci. 2026 Apr 17;27(8):3588. doi: 10.3390/ijms27083588.

干冰运输，避免反复冻融，-80℃保存1年，解冻后可4℃保存1~2周。

注意事项

1、为了您的安全，使用时请在洁净的实验室操作，穿戴好实验服及口罩等；

2、本产品仅限用于基础研究，不可用于包括人类体外诊断、治疗和用于人体在内的其他用途。 未经宜明生物的书面批准，不得将产品转让、转售、改造后转售、生产商业化产品，或者向其他第三方提供服务。