AAV具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优点,目前被广泛应用于CGT领域的基础研究和临床试验中。宜明生物拥可提供高品质的AAV系列现货产品,涵盖荧光蛋白功能基因,多种AAV血清型可供选择,满足客户不同的实验需求。
成熟的无血清悬浮
培养体系
拥有成熟的多种血清型
纯化平台
多空壳率检测平台
(可选AUC、电镜、HPLC三种方法进行检测)
已完成多种血清型RCAAV
检测方法开发
体外细胞感染
1、制备包含病毒的培养基
根据需要感染的细胞量、病毒滴度及感染MOI值计算所需要的病毒体积,制备包含病毒的培养基。PS:AAV的最佳感染MOI值因AAV血清型、细胞类型和实验条件而变化很大。通常,易感染细胞系所使用的MOI范围为1000-50000。但是,对于某些难感染的细胞系,MOI可能需要高2000000。我们建议您查阅文献或者在正式实验前,在目的细胞中用含有报告基因的AAV进行预实验以摸索最佳MOI。
最佳病毒用量的计算公式: AAV病毒体积=最佳MOI×细胞数目/病毒滴度。
例如,如果您目的细胞的最佳MOI=10000,您需要感染106的细胞,那么您共计需要1010 GC的病毒.如果病毒滴度为1×1013 GC/mL,那么您就需要将1ul的病毒加入培养基中。
2、AAV感染细胞
弃掉细胞培养基,将包含AAV病毒的培养基加入细胞中。6-12小时后,您可以更换或者添加新鲜培养基至培养孔或者皿中。在24、48、72和96小时,或者指定时间点,可以检测基因表达。
体内动物注射
为了确定用于小鼠或其他小动物注射的AAV最佳量,我们建议首次测试三种剂量:1011、1012和1013 GC/kg。
假设您的小鼠是20克,三种剂量是2x109、2x1010和2x1011 GC/小鼠。如果您正在进行非局部注射,您可能还需加入更高的剂量,如4x1011 GC/小鼠。请注意,这些是针对小鼠的通用指南,可能不适用于大型动物模型(如猪、非人灵长类动物)。
检测项目 | 检测方法 | |
鉴别 | ||
目的基因序列鉴别 | PCR+Sanger测序 | |
含量 | ||
基因组滴度检测 | qPCR | |
纯度 | ||
衣壳蛋白鉴别 | SDS-PAGE | |
空壳率检测 | AUC检测 | |
安全性 | ||
内毒素检测 | 凝胶限度试验法 |
全程干冰运输,收到产品后,请于-80℃长期保存。使用前于4℃融化。建议您在收到病毒后按照每次用量进行分装,避免反复冻融!PS:反复冻融会降低病毒活性!
注意事项
本产品仅限用于基础研究,不可用于包括人类体外诊断、治疗和用于人体在内的其他用途。未经宜明生物的书面批准,不得将产品转让、转售、改造后转售、生产商业化产品,或者向其他第三方提供服务。
宜明生物可提供多种血清型的荧光蛋白AAV现货产品,可广泛用于动物或细胞实验。