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RNA类
gRNA IVT制备

在基因编辑中,Cas蛋白和gRNA的形成复合物,由gRNA的特异序列指引与基因组特意靶点结合,并造成该位点的DNA双链断裂,逐渐成为CRISPR/Cas9技术更高效的实现途径。宜明生物创新性采用体外转录(IVT)工艺,避免大规模化学合成gRNA成本过高,及有毒化学试剂残留风险的问题,通过添加3’端Aptamer特殊序列提高了细胞内gRNA的稳定性。为您在细胞与基因治疗领域的研究提供高质量的一站式CRO和CDMO整体解决方案。

服务特色
拥有独特的sgRNA修饰技术与专利,保障sgRNA的功能与基因编辑效率
针对项目需求提供多元化QC工艺,可用于科研实验,助力临床研究
拥有GMP的sgRNA原液生产平台,可进行mg级和g级制备服务
全封闭式隔离器自动化灌装线可满足不同需求的制剂灌装要求
sgRNA一站式CRO和CDMO整体解决方案全流程质量管理
制备流程

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质量控制


目录检验项目检验方法
物理检查
外观目视法
序列鉴别
Sanger 测序一代测序
二代测序逆转录后二代测序
含量
浓度Nanodrop, UV absorbance
纯度
分子量MASS
gRNA纯度A260/A280
gRNA纯度HPLC/CE
蛋白残留BCA
DNA模板残留量qPCR
T7 RNA聚合酶残留量ELISA
DNase I 残留量ELISA
RNase抑制剂残留量ELISA
化学检定
渗透压摩尔浓度冰点下降法
PH值pH meter with pH probe
安全性
无菌检查直接接种法
支原体检查qPCR
细菌内毒素凝胶法-BDBU
工艺验证

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宜明生物独特的IVT制备工艺,模板DNA制备工艺稳定,产量稳定;经纯化条带单一,纯度高,有效保障IVT制备sgRNA的产量与质量。IVT反应原液中sgRNA:DNA质量比达到100:1,sgRNA浓度达到5 μg/μL;经过纯化,终产物主峰占比接近100%;总得率大于70%。

技术对比

sgRNA-IVT 是通过体外转录基于 dsDNA 模板进行的合成制备。该方法较之传统化学合成方法更安全,无需使用有毒有机溶剂和化学试剂。对上百个碱基的 RNA 序列,传统化学合成方法也常容易出现不确定的碱基突变,而 sgRNA-IVT 的制备过程使用了高质量的模板和高保真的聚合酶,可以有效降低碱基突变概率。

 为了提高 sgRNA 在细胞内的稳定性,我们在 sgRNA 的 3’端加入了 RNA aptamer 序列进行了修饰,可以使得基因编辑的效率与化学合成的 sgNRA类似或者更好。



服务流程
01
需求沟通
02
确定需求
03
签订合同
04
预付款项
05
启动项目
06
成果交付




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