CDMO服务
GMP级生产制备平台,先进治疗药品走向世界和商业化的桥梁
在基因编辑中,Cas蛋白和gRNA的形成复合物,由gRNA的特异序列指引与基因组特意靶点结合,并造成该位点的DNA双链断裂,逐渐成为CRISPR/Cas9技术更高效的实现途径。宜明生物创新性采用体外转录(IVT)工艺,避免大规模化学合成gRNA成本过高,及有毒化学试剂残留风险的问题,通过添加3’端Aptamer特殊序列提高了细胞内gRNA的稳定性。为您在细胞与基因治疗领域的研究提供高质量的一站式CRO和CDMO整体解决方案。
目录 | 检验项目 | 检验方法 |
物理检查 | ||
外观 | 目视法 | |
序列鉴别 | ||
Sanger 测序 | 一代测序 | |
二代测序 | 逆转录后二代测序 | |
含量 | ||
浓度 | Nanodrop, UV absorbance | |
纯度 | ||
分子量 | MASS | |
gRNA纯度 | A260/A280 | |
gRNA纯度 | HPLC/CE | |
蛋白残留 | BCA | |
DNA模板残留量 | qPCR | |
T7 RNA聚合酶残留量 | ELISA | |
DNase I 残留量 | ELISA | |
RNase抑制剂残留量 | ELISA | |
化学检定 | ||
渗透压摩尔浓度 | 冰点下降法 | |
PH值 | pH meter with pH probe | |
安全性 | ||
无菌检查 | 直接接种法 | |
支原体检查 | qPCR | |
细菌内毒素 | 凝胶法-BDBU |
宜明生物独特的IVT制备工艺,模板DNA制备工艺稳定,产量稳定;经纯化条带单一,纯度高,有效保障IVT制备sgRNA的产量与质量。IVT反应原液中sgRNA:DNA质量比达到100:1,sgRNA浓度达到5 μg/μL;经过纯化,终产物主峰占比接近100%;总得率大于70%。
sgRNA-IVT 是通过体外转录基于 dsDNA 模板进行的合成制备。该方法较之传统化学合成方法更安全,无需使用有毒有机溶剂和化学试剂。对上百个碱基的 RNA 序列,传统化学合成方法也常容易出现不确定的碱基突变,而 sgRNA-IVT 的制备过程使用了高质量的模板和高保真的聚合酶,可以有效降低碱基突变概率。
为了提高 sgRNA 在细胞内的稳定性,我们在 sgRNA 的 3’端加入了 RNA aptamer 序列进行了修饰,可以使得基因编辑的效率与化学合成的 sgNRA类似或者更好。